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三鹿事件:三聚氰胺检测方法汇总

  • 发布日期:2008-09-21      浏览次数:3711
    • 三鹿事件:三聚氰胺检测方法汇总

      [ 词:汇总 三聚氰胺检测方法 三鹿事件 ] 原文转自仪器信息网

       

      三鹿奶粉事件沸沸扬扬,各地致病患儿的致命成分——三聚氰胺检测方法汇总

        检测方法

      u  GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺

      u  Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测

      u  超液相色谱_电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺

      u  反相液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量

      u  液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺

      u  液相色谱法(HPLC)测定饲料中三聚氰胺的含量

      u  液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量

      u  固相萃取与液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺

      u  液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)分析宠物食品中三聚氰胺

      u  液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留

      u  GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺

        

      附:三聚氰胺检测方法示例

      仪器与条件

      u  液相色谱仪;二极管阵列检测器(DAD),检测波长240nm,柱温:40

      (一)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min

      (二)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流动相:缓冲液:乙腈=8515;缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH3.0;流速:1.0mL/min;

      u  离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX

       

      试剂与样品

        宠物饲料样品(农业部饲料供应中心提供);甲醇、乙腈为北京艾杰尔科技有限公司提供;氨水、乙酸铅、三氯乙酸、均购于北京化学试剂公司;三聚氰胺标准品、柠檬酸、辛烷磺酸钠(Sigma公司);甲醇为色谱纯,其他均为化学纯。

        

      实验方法

      1、样品前处理方法

      (1)标准样品配制:取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以提取液(0.1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。

      (2)提取:称取饲料样品5g,加入50ml0.1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)

      (3)净化(PCX小柱,60mg/3mL)

        a)活化及平衡:3mL甲醇,3mL

        b)上样:加入提取液3mL

        c)淋洗:3mL;3mL甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。

        d)洗脱:5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)

        e)浓缩:50,氮气吹干,20%甲醇/水定容至2mLHPLC分析或衍生后GC/MS分析。

       

      2、三聚氰胺被立案

      2.1三聚氰胺HPLC-UV检测方法

       三聚氰胺是强极性化合物,在传统的反相C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照美国食品药品监督管理局(FDA)的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱,可以得到良好的分离效果:

       (a)色谱柱:VenusilASBC84.6×250mm;标准:FDA方法;流动相:缓冲液:乙腈=8515;缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH3.0;流速:1.0mL/min;柱温:40oC;波长:240nm

       (b)色谱柱:VenusilASB-C184.6×250mm;标准:中国农业部颁标准方法;缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠;流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min;柱温:40;波长:240nm

       空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%

      2.2三聚氰胺LC-MS检测方法

        由于FDA公布的HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,因此限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,不能得到较好的分离定量〔3〕。

        基于此问题,艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离。因此方法中流动相不含离子对试剂,可以用于质谱检测。

        与FDA20074月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比较,该方法大大降低了zui低检测限(MSD0.5ppm;UV2ppm),提高了检测灵敏度。

        以该方法分别在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到很好的谱图。

        缓冲液:10mMNH4AC;流动相:Buffer:ACN=955;流速:1.0mL/min;进样量:样品先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10uL;柱温:40;波长:240nm

        

      结果与讨论

      1、阳离子交换柱(PCX)

        三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般应选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子交换和反相吸附两种机理,并具有以下优点:

        a)可通过两种不同溶液的洗涤(/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高检测的灵敏度。

        b)批次重复性好。

        c)回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。

      2LC-MS方法优点:

        (1)检测过程简便:无须添加离子对试剂,三聚氰胺就可得到良好的保留与分离,避免了配制离子对流动相的复杂过程。

        (2)提高了检测的灵敏度:无离子对试剂,可以用于质谱检测器,大大降低了zui低检测限(MSD0.5ppm;UV2ppm)

        (3)降低了检测成本:不用离子对试剂,就不再需要买价格较贵的离子对试剂了,从而降低了检测成本。

        (4)延长了色谱柱的使用寿命:避免了使用离子对试剂减少色谱柱寿命的影响。

        (5)该方法所使用的色谱柱具有通用性:无论是用FDA方法、中国农业部部颁标准方法和本公司开发的LC-MS方法,使用艾杰尔(Agela)ASB系列亲水色谱柱均能得到一个很好的检测结果,从而给客户提供了多种选择空间。

        国家食品质量监督检测中心有关人士说,在现有的国家标准奶粉检测中,主要进行蛋白质、脂肪、细菌等检测。三聚氰胺属于化工原料,是不允许添加到食品中的,所以现有标准不会包含相应内容。也就是说,三聚氰胺不属于常规检测项目,正常情况下,很少有人会想到去检测它。

       

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